2025年临床助理医师资格考试辅导：急性胰腺炎与细胞凋亡的测试办法
导读：细胞凋亡（apoptosis）是由基因控制的细胞自主地有序死亡，又称程序性细胞死亡，是一种消灭无需的和损害的细胞的生命调控过程。凋亡细胞形成凋亡小体非常快被临近的细胞所吞噬，其特征是不引起炎症反应。机体以牺牲少部分细胞为代价换取整体的存活与稳定。急性胰腺炎（acutepancreatitis，AP）的发病机制尚未完全了解，激活的胰蛋白酶对胰腺实质的自己消化是AP发生的要紧病理过程。近年来，大家已注意到急性水肿型胰腺炎的胰腺中存在着较多的凋亡细胞，而急性坏死型胰腺炎（acutenecrotizingpancreatitis，ANP）却极少出现凋亡细胞。这就提示细胞凋亡在AP的发生和进步过程中起着肯定用途。
细胞凋亡的定义和测试办法
细胞凋亡在生命过程中具备要紧的生物学意义，它严格控制着细胞死亡和增殖的平衡。细胞凋亡的产生大体是细胞表面分子同意到诱导因子刺激后将信号传入细胞内部，触发了细胞内部的遗传机制，激活了核酸内切酶，使细胞染色质DNA降解。核酸内切酶的活性依靠细胞内高浓度的钙离子，钙离子达到高水平的时间需要30～90min，细胞内钙离子浓度的升高是细胞发生调亡的一个要紧条件。细胞凋亡过程中有一系列特点性的形态学、生物化学、细胞学及分子生物学方面的改变。其中要紧的特点之一就是凋亡细胞染色体基因组的片段化，是由依靠钙离子的核酸内切酶催化的，这种核酸内切酶的性质尚不了解，但用途是十分一定的。核酸内切酶将核小体间的连接部位切割成单链DNA片段，这种DNA片段的断裂不是随机的，而是185bp的倍数，这种片段化在琼脂糖电泳中表现为特殊的云梯状带型，据此可初步确定细胞凋亡的存在。细胞凋亡时染色体DNA会产生单链切口，因此设计了原位切口翻译及标记技术。凋亡细胞的细胞膜通透性增加，小分子DNA片段丢失，可用流式细胞术技术测试。
1.形态学上的改变：胰腺炎时的胰腺凋亡细胞主要表现为有完整的细胞膜、胞核固缩、凋亡小体形成，线粒体和酶原颗粒完整。因为核小体DNA破裂成碎片，同焦点激光扫描显微镜察看到各种各样的三维结构。
2.端口标记测试（triphosphate-biotinnick-endlabeling，TUNEL）：TUNEL广泛用于测试DNA碎片片段，该办法具备操作简单、结果特异性强、重复性好，特别对于低水平凋亡测试更敏锐。kimura等用切除双侧肾上腺的大鼠诱导胰腺炎，使用半薄及超薄结构模式推行TUNEL和同焦点激光扫描显微镜检查，细胞凋亡的阳性结果是一致的。但在结扎胰胆管的模型中用TUNEL测试不出凋亡细胞，说明不同方法诱导出的胰腺炎模型对测试结果有影响。
3.流式细胞术（flowcytometry）;发生凋亡的细胞在细胞学上有一系列特点性改变，所有这类有别于坏死等其它种类细胞死亡的特点都能借助流式细胞术技术进行研究，该技术即能为细胞是不是发生凋亡提供客观依据，还能对细胞凋亡进行定量剖析，因此它是研究影响细胞凋亡原因及用途机制的一种简单可行的办法。
